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Nanophotometer?是利用樣品壓縮法進(jìn)行濃度測(cè)量的多功能儀器，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。由于壓縮法具有良好的樣品兼容性，特別適合于各類蛋白質(zhì)樣品的定量，無(wú)論是純化蛋白、總蛋白、肽段樣品或混合樣品，均有對(duì)應(yīng)的方法學(xué)支持。您可根據(jù)應(yīng)用要求，選擇合適的機(jī)型進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量分析，獲得可靠的結(jié)果。
UV280法 – 純化蛋白定量金標(biāo)準(zhǔn)
對(duì)于具有確定消光系數(shù)的純化蛋白，基于芳香族典型氨基酸的紫外吸收，UV280法可以非常準(zhǔn)確的進(jìn)行濃度測(cè)量，也是Nanophotometer?最常用的應(yīng)用之一。使用UV280法時(shí)，應(yīng)避免較強(qiáng)吸收物種的干擾，如裂解液RIPA成分。而對(duì)于消光系數(shù)未知的樣品，也可使用OD1法進(jìn)行相對(duì)濃度測(cè)量或估算。設(shè)備內(nèi)置了常用蛋白質(zhì)的消光系數(shù)，可以直接調(diào)用，也可以自定義消光系數(shù)，您可訪問(wèn)Implen官網(wǎng):
https://www.implen.de/protein-uv-spectrophotometer/
輸入蛋白質(zhì)的氨基酸序列，進(jìn)行消光系數(shù)的計(jì)算。
四種標(biāo)準(zhǔn)曲線方法
Nanophotometer?可進(jìn)行四種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的分析（各型號(hào)有差異），分別為BCA、Bradford、Lowry和Biuret （僅支持比色皿測(cè)量），可通過(guò)對(duì)應(yīng)的試劑盒與蛋白樣品進(jìn)行反應(yīng)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白濃度，適用于總蛋白及純化蛋白的定量。Nanophotometer?不同機(jī)型的掃描波長(zhǎng)在200-650nm或200-900nm，涵蓋了可見(jiàn)光區(qū)吸收的應(yīng)用。標(biāo)準(zhǔn)曲線支持存儲(chǔ)及直接調(diào)用，即使是單通道的機(jī)型也能便捷的進(jìn)行標(biāo)曲法蛋白定量。而N120高通量機(jī)型則支持標(biāo)準(zhǔn)曲線的多通道測(cè)量，可大幅提升測(cè)量效率。
A205肽鍵吸收法 – 寡肽定量
對(duì)于缺少芳香族典型氨基酸的寡肽和肽段樣品，由于無(wú)吸收峰，UV280法可能不適用。此時(shí)可使用UV205法測(cè)量肽鍵的半峰吸收，獲得樣品的吸光值和濃度。近紫外區(qū)的測(cè)量對(duì)于超微量分光光度計(jì)而言具有挑戰(zhàn)性，容易受到檢測(cè)器和光學(xué)系統(tǒng)噪聲及漂移的影響。Nanophotometer?具有出色的光學(xué)系統(tǒng)和4096CMOS陣列檢測(cè)器配置，可確保在全波長(zhǎng)范圍內(nèi)的測(cè)量準(zhǔn)確性。
公式法 – 混合物中蛋白定量
一些樣本中除蛋白質(zhì)外還包含其他在280nm處有吸收的組分，可通過(guò)校正系數(shù)及公式進(jìn)行其中蛋白濃度的測(cè)量，如含有核酸的樣本，可使用經(jīng)驗(yàn)公式：蛋白質(zhì)濃度=1.45×A280－0.74×A260。也可通過(guò)純品的測(cè)量，確認(rèn)A280的校正系數(shù)，進(jìn)行干擾組分吸光值的扣除。Nanophotometer?可進(jìn)行公式創(chuàng)建，滿足混合物中蛋白定量的應(yīng)用需求。
獨(dú)特的樣品壓縮技術(shù)使Nanophotometer?區(qū)別于同類產(chǎn)品，蛋白質(zhì)樣品由于溶質(zhì)和溶劑成分、粘度等因素的影響，往往會(huì)降低表面張力而不易被測(cè)量，而這恰恰令樣品壓縮法能夠大顯身手。設(shè)備具備豐富的蛋白質(zhì)測(cè)量應(yīng)用程序及方法學(xué)設(shè)定，還具備背景校正和樣品質(zhì)量控制功能。僅需微升級(jí)樣品，即可獲得紫外-可見(jiàn)全光譜吸收數(shù)據(jù)，包括蛋白及偶聯(lián)物的同時(shí)分析。從生物醫(yī)學(xué)到藥物研發(fā)，從結(jié)構(gòu)生物學(xué)到交叉學(xué)科，Nanophotometer?是蛋白質(zhì)定量的理想工具。
